先进的生物分离技术
写起来很复杂...很多地方都有这样的实验步骤。我看了一下下面这个，还是可以的
酶的分离很简单，但很麻烦，需要很长时间
酶的分离纯化方法简介
。这些酶大多数是水解酶。例如，用于葡萄糖酶促生产的两种淀粉酶是由枯草芽孢杆菌和根酶在发酵过程中分泌的。这类酶一般含量高，容易获得；另一种酶在细胞内产生后并不分泌到细胞外，而是在细胞内起催化作用。称之为细胞内酶的发酵生产中的一系列化学反应，如柠檬酸、肌苷酸、谷氨酸一钠等，是在细胞内各种酶的催化下进行的。在细胞中，酶往往与细胞结构结合在一起，有一定的分布面积，催化的反应有一定的顺序，从而使许多反应有序进行。
酶的来源大多是生物细胞。虽然生物细胞产生的酶总量很高，但每种酶的含量很低。比如胰腺的中间消化过程中有很多种水解酶，但每种酶的含量差别很大。
所以在提取一种酶的时候，首先要选择酶最丰富的材料，比如胰腺，是提取胰蛋白酶、糜蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶的好材料。由于从动物内脏或植物果实中提取酶制剂受原料限制，如果不能综合利用，成本很高。目前工业上大量酶制剂是通过培养微生物获得的。利用微生物生产酶制剂有很多优点，不受气候和地理条件的限制。而且动植物中的大多数酶都可以在微生物中找到，微生物可以快速繁殖，产生丰富的酶。还可以通过选育菌种来提高产量，并且可以用廉价的原料大量生产。
在生物组织中，除了我们需要的那种酶之外，往往还有许多其他的酶、一般的蛋白质和其他杂质，所以在制备一种酶制剂时，需要经过分离纯化等程序。
酶是一种具有催化活性的蛋白质，蛋白质容易变性，因此在酶的纯化过程中应避免使用强酸强碱，并保持较低的温度。在纯化过程中，通过测定其催化活性，更容易追踪酶在分离纯化过程中的去向。酶的催化活性也可以作为选择分离纯化方法和操作条件的指标。在酶的整个分离纯化过程的每一步，都要一直测定酶的总活性和比活性，从而知道通过某一步回收了多少酶，纯度提高了多少，从而决定了某一步的选择。
酶的分离和纯化一般包括三个基本步骤:提取、纯化、结晶或制备。先将所需的酶从原料中引入到溶液中，溶液中不可避免地带有一些杂质，然后将酶从溶液中选择性分离出来，或者将杂质从溶液中选择性去除，再制成纯化的酶制剂。下面全面介绍酶分离纯化的常用方法:
1.预处理和固液分离技术
1.细胞破裂)
高压均质机法:该方法可用于破碎酵母、大肠杆菌、假单胞菌、芽孢杆菌甚至黑曲霉。当细胞悬液在高压下被引入一个孔径可调的排放孔时，当细菌从高压环境转移到低压环境时，细胞很容易破碎。菌悬液一次通过均质机的细胞破碎率为12%-67%。细胞破碎率与细胞类型有关。为了达到90%以上的细胞破碎率，至少细菌悬液应该通过匀浆器两次。最好增加手术压力，减少手术次数。但据报道，当操作压力达到175Mpa时，破碎率可达100%。当压力超过70Mpa时，细胞破碎率上升缓慢。高压均质机的阀门是影响细胞破碎率的重要因素。丝状细菌会堵塞均质机的阀门，尤其是当细菌浓度较高时。生长在丰富培养基上的大肠杆菌比生长在合成培养基上的大肠杆菌更难破碎。
细菌酶处理:蛋清中含有丰富的溶菌酶，价格便宜，常用来溶解细胞。具体是将43 kg溶壁微球菌置于0.5%氯化钠溶液中使细胞浓度为5%(干重)，用0.68kg(干重)蛋清在35℃处理20分钟，所得细胞碎片用等体积乙醇处理，离心除去细胞碎片和胞内蛋白，然后将乙醇浓度提高到75%。
2.离心法
离心分离过程可分为离心过滤、离心沉淀和离心分离三种，使用的设备有过滤离心机、沉降离心机和离心机。过滤离心机的筒壁上有小孔，筒壁上有过滤介质，一般可以用来处理悬浮固体颗粒大，含固量高的场合。沉降离心机用于低固体浓度的固液分离，如发酵液中的菌体、盐析法处理的蛋白质或有机溶剂等。分离器用于分离两种密度略有差异的不相溶的乳状液或含有微量固体颗粒的乳状液。
生物领域使用的离心机系统除了要满足离心机的一般要求外，还要满足生物生产的技术要求，包括灭菌、冷却、密封等，以保证产品不受污染，环境不受污染。现代离心装置包括以下三个步骤，以及程序控制:离心、离心系统的灭菌和现场清洗。比如阿尔法-拉瓦公司的离心机产品，有双轴向密封，由安装在转鼓上下主轴上的碳化硅动环和定环组成。密封采用水连续冷却和润滑，可防止产品被污染和生产过程中排放的废弃物污染环境。离心机就像一个密闭的压力容器，可以在121℃的温度下进行蒸汽灭菌。离心机在离心机转鼓周围装有冷却夹套，可以充分冷却悬浮液和浓缩固体，有效控制温度，这对生物制品非常重要。如BTPX205离心机可用于细胞收集、培养液纯化和细胞碎片分离，可用于疫苗、酶制剂等的提取。机器的其他辅助系统和控制系统也比较完善，如压力指示器、测力计、温度传感器、液位传感器等。
3.膜分离技术
超滤是蛋白质纯化过程中使用的主要膜分离技术。在静压力的作用下，溶液通过孔径很小的滤膜，使溶液中分子量较小的溶质通过膜，而大分子被截留在膜表面。大多数超滤膜由非常薄的功能膜和厚的支撑膜组成。功能膜决定膜的孔径大小，而支撑膜提供机械强度以抵抗静压。超滤浓缩的优点是:操作条件温和，不发生相变，不破坏生物活性物质。
超滤系统主要由料液储罐、泵、超滤器和渗透液收集罐组成。料液由泵泵入超滤器，水和低分子量物质从超滤器排出。浓缩后的料液在料液储罐、泵和超滤器中循环。当料液浓缩到一定倍数时，可作为浓缩料液进一步处理。
超滤应用于蛋白质物质的浓缩和脱盐时，应注意以下问题:一是在超滤循环过程中，由于泵和叶轮与料液之间的放热摩擦，料液温度会逐渐升高，造成蛋白质分子的损失。因此，料液储罐应配有冷却系统和自动温度测控系统。其次，某些酶中辅因子的损失是一个问题:有些酶含有分子量小的辅因子，超滤时容易从透过液中除去，所以超滤前或超滤后要加入一定浓度的辅因子。
超滤和亲和层析也可以结合使用以提高分离纯度。其工作原理是:当溶液中待分离的蛋白质畅通无阻地通过超滤膜的微孔时，如果膜的一侧结合有亲和配体，蛋白质就会与配体结合，从而在膜的这一侧聚结。其他不与配体结合的物质将通过该孔被带走。然后，用合适的洗脱剂洗脱蛋白质，洗脱剂用于进一步分离和纯化。
4.泡沫分离
原理:气体被引入含有多种成分的溶液中。由于这些组分的表面活性不同，有些组分会在溶液表面形成泡沫，而泡沫的稳定性取决于操作条件和溶液的生物特性。泡沫中含有较多的表面活性成分，因此泡沫成分的种类和含量与溶液中不同。这样，溶液中的组分可以分离。
蛋白质容易吸附在气液界面上，有利于其结构的稳定。泡沫分离过程是:蛋白质从主溶液向气液界面扩散，可能是可逆的，也可能是不可逆的；分子重新排列，一般认为在空气-水界面会形成两种类型的膜，一种是薄膜，一种是厚膜，可能会造成多个分子聚集在一起的现象。在气-液界面形成的蛋白质膜可以是单层或多层的。膜的类型取决于主溶液和气液界面上蛋白质的特性、结构和浓度。
泡沫分离的目的是另一方面提高酶蛋白的富集率(泡沫中蛋白的浓度/初始溶液中蛋白的浓度)和酶蛋白的提取率(泡沫中蛋白的提取率/蛋白的初始质量)，或者使多组分混合物中某一组分的分配系数最大化。
第二，提取
沉淀
1.盐析
常用的盐析剂是硫酸铵，溶解度高，价格低。硫酸铵沉淀蛋白质的能力很强，其饱和溶液可以沉淀大部分蛋白质。对酶没有破坏作用。
pH控制:要考虑酶的溶解性和稳定性。当达到酶的等电点时，其溶解度最小，容易沉淀。但有些酶在再次达到等电点时稳定性较差，要选择最佳的pH值。一般要求在酶的pH值最稳定的前提下，考虑最适合酶沉淀的pH值。操作中一旦确定了最适pH值，甲酸或碱应在加入硫酸铵前调节酶液的pH值，避免溶液pH值的波动，以免破坏酶的稳定性。加入硫酸铵时注意搅拌，注意加入硫酸铵的速度，一般由少到多，慢慢加入硫酸铵，尽可能磨成细粉。
温度控制:有些酶在较高温度下稳定性较好，常温下可以盐析出来，而大部分酶应尽可能在低温下操作。
酶液净置:加入硫酸铵后，要让酶液静置一段时间，使酶蛋白完全沉淀。酶静置后，不应搅拌。
2.有机溶剂沉淀:有机溶剂选择:可用于酶促蛋白质沉淀的有机溶剂包括醇类，如甲醇、乙醇和异丙醇。乙醇亲水性好，可以防止蛋白质变性，酶蛋白在其中的溶解度也低。
有机溶剂沉淀操作:有机溶剂一般会使蛋白质变性，温度高时变性的蛋白质分子会变成永久失活。因此，最好在0℃以下用有机溶剂处理。有机溶剂沉淀的酶蛋白不宜放置过久，应尽快溶解于水中。
3.高分子絮凝剂沉淀
高分子絮凝剂，如葡聚糖、聚乙二醇等，与酶分子竞争水分子，具有脱水作用使酶沉淀。聚乙二醇作为沉淀剂的优点是在水溶液中浓度可达50%，浓度为6%-12%的大部分蛋白质都能沉淀出来。这种试剂不需要低温操作，对蛋白质的稳定性也有一定的保护作用。聚乙二醇不会被吸附，所以不需要在离子交换吸附前去除。
4.与金属离子和复合物沉淀，酶和其他蛋白质会形成低溶解度的金属盐。用金属离子沉淀的缺点是酶与金属离子作用后，可逆变化差，特别是与巯基衍生物作用，会催化酶的变性和失活。
5.用特殊试剂沉淀:链霉素可以选择性地去除核酸，从而沉淀细胞内的酶。链霉素盐(浓度为0.5-1.0毫克/毫克蛋白)选择性沉淀核酸的效果优于锰离子，且酶不易失活。
6.亲和沉淀:亲和沉淀技术是将亲和反应的高选择性和低通量与沉淀操作的高通量和选择性有机结合而形成的。配体与可溶性载体偶联形成载体-配体复合物，在一定条件下与生物分子结合后可以沉淀。
配体-载体复合物可以选择性地与蛋白质结合，溶液的pH值、离子强度、蛋白质浓度等条件对亲和结合的影响很小。只有竞争性配体才会降低产物与原配体的亲和结合，甚至逆转亲和结合。
诱导沉淀的方法有:离子交联；加入带相反电荷的聚合物；加入带相反电荷的疏水基团；改变pH值诱导疏水沉淀；温度引起的沉淀。
亲和结合:将亲和配体加入到含有目标蛋白的溶液中，调节与沉淀相关的条件以促进亲和结合。
洗涤:对于处理过的粗液中的亲和沉淀，可能发生非特异性结合，尤其是当使用带电聚合物时。离子交换的作用会使其他蛋白质共沉淀，因此在分离目标物之前应洗涤沉淀物。方法如下:加入适当的清洗剂重新溶解沉淀，然后沉淀；或者在特定洗脱之前，彻底洗涤沉淀物。在上述过程中，感兴趣的蛋白质应该始终保持与配体的亲和结合状态。
配体-载体复合物和目的蛋白的分离:分离后需要保证目的蛋白和配体-载体复合物的回收，目的蛋白要达到一定的纯度，并有较高的回收率。
柠檬树在高压下可以繁殖多少年
柠檬树在高压下可以繁殖一个月。主要采用高压繁殖，5、6月生长旺盛。选择无病虫害的枝条作为母枝进行繁殖。高压部分剪去叶子，用刀环剥去皮层4-6厘米，但不能损伤木质部分。然后用长约12 cm，宽约10 cm的塑料薄膜将皮下部分剥离。高压2厘米后，叶片呈淡绿色，塑料袋长出白而嫩的根，逐渐充满周围，说明高压成功。9-10月修剪塑料袋下部，轻轻揭去塑料薄膜，注意不要弄破泥，种在花盆里，浇水，放在阴凉处10-15天，逐渐增加光照长出新叶。
驱蚊最有效的植物有哪些
驱蚊有效的植物有:驱蚊草、薄荷、除虫菊、薰衣草、七里香等。
1.驱蚊草
驱蚊草也叫蚊帐香草，一年四季散发柠檬香味，不仅有驱蚊效果，还能净化空气。温度越高，香味越浓，驱蚊效果越好。可盆景栽培，半年即可生长成熟，存活期长。如果保养得当，可以存活10年以上。
2.铸造
薄荷中含有一种特殊的芳香气味，使蚊子头晕目眩。而且薄荷不仅能驱蚊，被蚊子叮咬后直接用水煮薄荷叶，还能起到消炎止痒的作用。
3.除虫菊
除虫菊是盆栽和切花的好材料，也是著名的药用植物。干燥后的树叶和叶子可制成粉末或蚊香，可消灭害虫，除臭。蚊子闻到除虫菊的味道就会溜走。
4.淡紫色
薰衣草有驱蚊安神的功效。家里可以盆栽观赏，驱蚊效果好。建议放在卧室。淡淡的香气可以驱虫，有安神的作用。
5.七里香
七里香是一种四季常青的小灌木。它看起来像一个伞房，有明亮的叶子和浓密的白花。开花后还能结出红色浆果，增加美感。触摸它的叶子会散发出浓浓的甜香味，有很好的驱蚊效果。
扩展信息:驱蚊是指用各种方法驱赶蚊子。驱蚊植物，如夜来香、薰衣草、猪笼草等，在生长过程中会通过叶片、花朵等组织或器官散发出一些气味或特殊的化学物质，对人体无害，但可以赶走靠近它们的昆虫，所以人们用它们来达到驱蚊的目的。
